产品货号:
HR8079
中文名称:
厚壁微生物蛋白提取试剂盒
英文名称:
Thick wall microbial protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可以从各种厚壁微生物菌体中提取总蛋白。包括各种难以裂解的酵母、丝状真菌、革兰氏阳性菌、芽孢、微藻、虫卵等有较厚的细胞壁的样品。提取过程简单方便,不需要机械研磨或有机溶剂。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高质量的蛋白提供了保证。每毫升菌液大概可以提得5~10mg蛋白。采用BCA或Lowry法进行蛋白定量。
本试剂盒提取的蛋白可用于报告基因检测、SDS-PAGE电泳检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验。
本试剂盒提取的蛋白样品含高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳,需要除盐后再上样。如下游实验需要样品可以直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用其他货号的试剂盒。
- 使用方便:不需昂贵设备。
- 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
- 将蛋白提取的时间缩短至30分钟~1小时。
- 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
- 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
- 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
- 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
- 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
组分 | 50T | 100T |
试剂A:厚壁微生物蛋白提取液 | 25mL | 50mL |
试剂B:蛋白稳定剂 | 250μL | 500μL |
试剂C:蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
保存:蛋白酶抑制剂-20℃保存,蛋白稳定剂-20℃保存,蛋白提取液室温保存,有效期1年。
移液器、离心机、涡旋振荡器
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
- 本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA,根据需要可自行加入。
- 裂解液的准备:
根据所需要提取的样本量,每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和5μL蛋白稳定液,充分混匀后置冰上备用。 - 在4℃ 12000×g条件下将菌液离心5分钟,弃上清,尽量吸干剩余液体,收集菌体。
- 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
- 按大约每50mg~100mg湿重菌体样本加入500μL蛋白提取液,吹打混匀,振荡20~30分钟。
- 300w,10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变澄清。若无超声条件,可不超声,将上一步骤裂解液处理时间延长,至澄清。
- 在4℃ 12000×g条件下将菌液离心10分钟,将上清移入冷的干净离心管。
- 即得总蛋白样品。
- 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。
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